細胞別稱 |
SF9; sf9; SF-9; Sf-9; sf-9; Sf 9; Spodoptera frugiperda clone 9; Sf clone 9; IPLB-Sf-9AE; IPLB-SF-9AE; IPLB-SF-9; IPLB-Sf-9; IPLB-Sf9 |
細胞來源 |
卵巢 |
細胞形態(tài) |
規(guī)則的帶有顆粒球形 |
細胞類型 |
自發(fā)永生化細胞 |
生長特性 |
半貼半懸 |
安全等級 |
BSL1 |
包裝規(guī)格 |
T25瓶或者1mL凍存管包裝 |
倍增時間 |
2~3天 |
傳代比例 |
1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定) |
保藏機構 |
ATCC; CRL-1711 DSMZ; ACC-125 ECACC; 89070101 |
【培養(yǎng)保存】
培養(yǎng)體系:TNM-FH+10% FBS+1% P/S
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,;溫度:28℃
凍存條件:基礎培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS,液氮保存
注意:該細胞為28℃培養(yǎng),不通二氧化碳,請?zhí)崆皽蕚鋵S门囵B(yǎng)箱。
【傳代步驟】
當細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
(1).將所有細胞全部收集在15ml離心管中,
(2).在1000RPM條件下離心5分鐘
(3).棄去上清液,加入完全培養(yǎng)基后吹勻;
(4).收到細胞后首次傳代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新培養(yǎng)基的25瓶中,建議凍存一支備用,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:3的比例進行。
注:懸浮細胞需要雙倍體積來培養(yǎng),sf9最適的pH6.2,溫度27~28℃。
【凍存步驟】
(1).細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù);
(2).5min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x10(6)/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識;
(3).將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。