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脂質(zhì)體 (Liposome) 是由脂質(zhì)分子組成的囊泡結(jié)構(gòu)，其脂質(zhì)雙分子層形成疏水外殼和內(nèi)部的水相空腔，兼具親水和疏水特性。脂質(zhì)納米粒（Lipid Nanoparticle，LNP）是使用脂質(zhì)形成納米微粒的一種。

mRNA是帶有負(fù)電荷的長(zhǎng)鏈核苷酸序列，而細(xì)胞膜表面也帶有負(fù)電荷，靜電排斥使得mRNA分子很難穿過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。并且，因?yàn)閙RNA分子是單鏈結(jié)構(gòu)，本身極易被體內(nèi)的多種酶迅速降解。需要保護(hù)性外殼才能進(jìn)入細(xì)胞。因?yàn)榧?xì)胞膜主要由脂質(zhì)組成，利用LNP包封RNA可通過(guò)細(xì)胞膜并將RNA釋放到細(xì)胞質(zhì)中。永久性陽(yáng)離子脂質(zhì)組成的LNP由于能與帶負(fù)電的細(xì)胞膜發(fā)生靜電作用而引起細(xì)胞毒性，因此能夠在體內(nèi)酸性環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)閹д姾傻腖NP是現(xiàn)在的主流趨勢(shì)。包封mRNA的LNP與細(xì)胞膜具有良好的相融性，無(wú)免疫原性，可將其高效地遞送至細(xì)胞內(nèi)。

       裝載mRNA的LNP除了含有帶負(fù)電荷的mRNA外，另有四種成分：可電離的陽(yáng)離子磷脂（ionizable lipids），中性輔助磷脂（Phospholipid），膽固醇（Cholesterol），聚乙二醇修飾的磷脂（PEG-lipid）。

一、LNP制備流程

1、配制脂質(zhì)乙醇溶液

       2、計(jì)算需包封mRNA或DNA質(zhì)量
       3、配置mRNA-檸檬酸緩沖液
       使用超純水分別配制100mM的一水合檸檬酸和二水合檸檬酸鈉各50ml；
       取33.0ml檸檬酸溶液和17ml二水合檸檬酸鈉溶液混合。
       4、微流控混合
       使用本公司先進(jìn)的微流控LNP制備平臺(tái)進(jìn)行LNP包封。
       5、透析儲(chǔ)存
       6、質(zhì)控檢測(cè)
       使用動(dòng)態(tài)光散射儀，酶標(biāo)儀對(duì)LNP粒徑、均一度和包封率進(jìn)行QC檢測(cè)。
      7、成品出庫(kù)
 

二、LNP服務(wù)介紹
       基恩科(Genecarer)生物根據(jù)客戶的科研需求，封裝所需mRNA和DNA。

       基恩科(Genecarer)生物擁有國(guó)內(nèi)一流水平的LNP封裝平臺(tái)，制備的LNP具有粒徑單一，單分散度高度可控，批次間良好的重現(xiàn)性，包封率高的優(yōu)點(diǎn)。
       基恩科(Genecarer)生物提供給客戶的LNP產(chǎn)品毒性低，免疫原性低，對(duì)細(xì)胞幾乎無(wú)損傷，并可實(shí)現(xiàn)＞95%的轉(zhuǎn)染效率。
 

三、質(zhì)量控制介紹
       1、粒徑與均一度
       使用動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定。

2、包封率測(cè)定
       使用Quant-iTTMRiboGreen®RNA試劑進(jìn)行包封率測(cè)定。Quant-iTTMRiboGreen®RNA無(wú)法穿過(guò)LNP膜，只能與膜外游離的核酸結(jié)合。使用1%triton-100X對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行破乳，破乳后LNP包封的RNA得以釋放，可結(jié)合Quant-iTTMRiboGreen®RNA。通過(guò)計(jì)算破乳前后核酸定量差值與破乳后核酸總量的比，則可計(jì)算出包封率。
      3、細(xì)胞轉(zhuǎn)染率
       以293T為例，使用包封eGFP mRNA的LNP對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
       24孔板細(xì)胞鋪板，過(guò)夜孵育。
       取eGFP-mRNA LNP（50ug/ml），用MEM培養(yǎng)基稀釋至2.5ug/ml。加入鋪好的細(xì)胞孔板中，孵育4/6/8/12/24/48小時(shí)后，使用熒光顯微鏡觀察綠色熒光表達(dá)。

四、我們的優(yōu)勢(shì)
       A.現(xiàn)貨LNP產(chǎn)品，即定即發(fā)，最大限度節(jié)省您寶貴的科研時(shí)間
       B.國(guó)內(nèi)一流的LNP微流控包封平臺(tái)，為您提供高質(zhì)量LNP產(chǎn)品
       C.IVT-mRNA和LNP平臺(tái)一體化服務(wù)，滿足您的科研需求
 

五、LNP轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞、注射動(dòng)物

包封eGFP mRNA 的LNP轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，＞80%的轉(zhuǎn)染效率 

包封Luciferase mRNA 的LNP注射小鼠后，活體成像：

六、LNP現(xiàn)貨產(chǎn)品的舉例