基恩科生物（Genecarer）非整合慢病毒（Integrase-deficient lentivirus，簡稱IDLV）是在慢病毒載體基礎(chǔ)上經(jīng)過基因改造對整合酶基因進行突變改造，由此推出的整合酶缺陷的和整合酶調(diào)節(jié)基因突變的的GC-Lenti-ID非整合慢病毒包裝系統(tǒng)。這種整合酶缺陷型的慢病毒在目的細胞中產(chǎn)生了環(huán)狀附加體，游離于目的細胞基因組外，這些載體在分裂細胞中瞬時表達，但在非分裂細胞中穩(wěn)定表達。
與整合型慢病毒相比，GC-Lenti-ID導(dǎo)致插入突變的風險大大降低，適合與普通方法難轉(zhuǎn)染的原代細胞、干細胞和iPS細胞，應(yīng)用于RNA干擾、同源重組等研究應(yīng)用。
GC-Lenti-ID非整合慢病毒包裝系統(tǒng)屬于第三代的包裝系統(tǒng)，將慢病毒的反式作用原件gag、pol，env等基因用輔助質(zhì)粒表達(GC ID helper1.0)表達，表達水泡性口腔炎病毒（VSV）糖蛋白（G）的包膜蛋白載體(GC ID helper2.0)，表達突變gag質(zhì)粒載體（GC ID helper3.0）四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK -293T細胞，收集病毒，病毒濃縮純化，病毒滴度測定和質(zhì)量檢測，四質(zhì)粒系統(tǒng)能大大降低復(fù)制病毒的可能性，生物安全性進一步提高。
一、IDLV慢病毒包裝服務(wù)：
基恩科生物（GeneCarer）根據(jù)實驗?zāi)康男枰獦?gòu)建不同的表達載體（過表達、敲除、干擾）等，GC ID helper 1.0質(zhì)粒和GC ID helpher 2.0質(zhì)粒，GC ID helper3.0,以及表達載體4質(zhì)粒用磷酸鈣法共轉(zhuǎn)染293T細胞，48h，96h各收集一次上清，進行過濾、離心、濃縮、純化，分裝后進行病毒滴度測定和質(zhì)量檢測。
二、非整合慢病毒載體的選擇：
基恩科生物（GeneCarer）提供各種載體可供選擇，不同啟動子，不同篩選標記，不同標簽蛋白。
三、慢病毒的質(zhì)量控制：
基恩科生物（GeneCarer）結(jié)合《中國藥典》，多糖結(jié)合病毒疫苗中針對疫苗制劑等提出的產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的要求，同時針對細胞實驗用病毒/動物實驗用病毒/臨床用病毒的不同需求，建立企業(yè)病毒產(chǎn)品質(zhì)量標準，每一批病毒產(chǎn)品都經(jīng)過質(zhì)量部嚴格檢測，測定慢病毒的滴度、純度和各項生物物理指標。
檢測項目 | 檢測方法 | 質(zhì)量標準參考結(jié)果 |
顏色 | 肉眼判定 | 無色 |
澄清度 | 肉眼判定 | 透明，無異物 |
粘稠度 | 移液器吸取 | 無粘稠和吸液滯后現(xiàn)象 |
PH | 筆式PH計 | 7.2-7.4 |
細菌 | 平板培養(yǎng)法 | 陰性 |
真菌 | 平板培養(yǎng)法 | 陰性 |
支原體 | Nest PCR | 陰性 |
內(nèi)毒素 | 鱟試劑 | ≤50TU/mL |
純度 | SDS-PAGE(銀染) | 無雜帶 |
有效滴度 | qPCR法 | ≥2E+8TU |
四、非整合慢病毒定制服務(wù)：
基恩科生物（GeneCarer）提供非整合慢病毒現(xiàn)貨定制服務(wù)，提供基因（含circRNA 、lncRNA、microRNA等）過表達、基因干擾、基因敲除慢病毒，具體實驗服務(wù)流程如下圖：
五、非整合慢病毒與其他病毒載體的比較
病毒包裝系統(tǒng) | 非整合慢病毒 | 慢病毒 | 腺病毒 | 腺相關(guān)病毒 | 單純皰疹病毒 |
包裝容量 | 8Kb | 8Kb | 8Kb | 4.7Kb | 理論最大150kb |
病毒基因組 | RNA病毒 | RNA病毒 | 雙鏈線性DNA病毒 | 單鏈線性DNA病毒 | 雙鏈線性DNA病毒 |
感染細胞類型 | 大部分分裂/不分裂細胞 | 大部分分裂/不分裂細胞 | 大部分分裂/不分裂細胞，原代細胞感染率高 | 不同血清型感染不同細胞 | 大部分分裂/不分裂細胞，神經(jīng)元細胞感染率高 |
感染效率 | 中 | 中 | 高 | 中 | 中 |
基因組整合 | 非整合 | 整合 | 非整合 | 非整合/部分整合 | 非整合 |
表達方式 | 瞬時表達 | 穩(wěn)定表達 | 瞬時表達 | 瞬時表達/部分長期表達 | 瞬時表達 |
免疫原性 | 低免疫原性 | 低免疫原性 | 高免疫原性 | 低免疫原性 | 高免疫原性 |