病毒樣顆粒(virus-like particles,VLP)指含有某種病毒的一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白的病毒顆粒,不含有核酸病毒,俗稱偽病毒顆?;蚣俨《绢w粒。病毒樣顆粒分為無囊膜和有囊膜VLP。無囊膜的VLP指衣殼蛋白單獨(dú)表達(dá)即可以組裝成VLP結(jié)構(gòu),如豬細(xì)小病毒VP2蛋白,人乳頭狀瘤病毒L1蛋白等。有囊膜VLP指包含有宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜成分,囊膜成分覆蓋于VLP表面,與天然病毒具有相似的結(jié)構(gòu)和功能,如乙型肝炎病毒VLP,病毒肝炎病毒VLP等。大多數(shù)VLP的空殼結(jié)構(gòu)為二十面體或螺旋結(jié)構(gòu),由幾種特定的結(jié)構(gòu)蛋白組成,它被廣泛用于疫苗生產(chǎn)和抗原呈遞。
基恩科VLP包裝基于HEK293、Vero、MDCK的哺乳動(dòng)物包裝體系,包裝的VLP更接近蛋白的天然結(jié)構(gòu),尤其有囊膜的膜蛋白VLP,可以更好的進(jìn)行蛋白表型如抗原抗體篩選、噬菌體展示、酵母展示、免疫原產(chǎn)生和配體結(jié)合測、靶向藥物篩選等應(yīng)用研究。其次,通過不斷的包裝體系優(yōu)化,物理結(jié)構(gòu)上VLP具有更好的均勻度,能夠保持高密度靶蛋白的天然結(jié)構(gòu)。創(chuàng)新的VLP包裝系統(tǒng),可以滿足不同生物結(jié)構(gòu)的蛋白包裝,可為客戶提供量身定制VLP包裝服務(wù)。
一、不同調(diào)控方式下的包裝服務(wù)
1.膜蛋白(Membrane Protein VLP)的表位表達(dá)
膜蛋白由于多跨膜結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)復(fù)雜,表達(dá)量低,體外表達(dá)純化制備困難,體外保存穩(wěn)定性差、細(xì)胞過表達(dá)存在空間阻力(因?yàn)槟さ鞍滓偳哆M(jìn)細(xì)胞膜才能有活性)等因素對(duì)膜蛋白的高表達(dá)產(chǎn)生了極大的挑戰(zhàn)。基恩科生物基于VLP平臺(tái)技術(shù),能夠?qū)⒛さ鞍淄暾恼故驹谀康募?xì)胞膜的表面,極大地增加了膜蛋白的表達(dá)量。
2.核/質(zhì)蛋白包裝服務(wù)
基恩科生物提供的VLP包裝服務(wù)不僅可以將膜蛋白完整的表達(dá)在細(xì)胞膜上,還可以將其他非膜蛋白準(zhǔn)確的遞送進(jìn)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核,有效逃逸核內(nèi)體-溶酶體對(duì)蛋白的降解,且蛋白活性不受影響。
3.生物素化蛋白VLP包裝服務(wù)
基恩科可以在VLP包裝過程中,在目的蛋白表達(dá)盒上加AVI標(biāo)簽,進(jìn)行目的蛋白的生物素標(biāo)記。生物素連接到目標(biāo)分子的AVI標(biāo)簽上,具有很好的特異性。另外由于生物素很小,影響蛋白本身的活性或空間結(jié)構(gòu)的可能性很小?;赩LP的生物素-蛋白包裝可以作為很好的研究材料,廣泛應(yīng)用于各種蛋白互做研究。
二、質(zhì)量控制
基恩科生物(GeneCarer)結(jié)合《中國藥典》,多糖結(jié)合病毒疫苗中針對(duì)疫苗制劑等提出的產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的要求,同時(shí)針對(duì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用病毒顆粒/動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用病毒顆粒/臨床用病毒的不同需求,建立企業(yè)假病毒顆粒產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),每一批假病毒顆粒產(chǎn)品都經(jīng)過質(zhì)量部嚴(yán)格檢測,測定病毒樣顆粒蛋白的質(zhì)量、純度和粒度均一度等檢測。
檢測項(xiàng)目 | 檢測方法 | 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參考結(jié)果 |
顏色 | 肉眼判定 | 無色 |
澄清度 | 肉眼判定 | 透明,無異物 |
粘稠度 | 移液器吸取 | 無粘稠和吸液滯后現(xiàn)象 |
PH | 筆式PH計(jì) | 7.2-7.4 |
細(xì)菌 | 平板培養(yǎng)法 | 陰性 |
真菌 | 平板培養(yǎng)法 | 陰性 |
支原體 | Nest PCR | 陰性 |
內(nèi)毒素 | 鱟試劑 | ≤50TU/mL |
三、基恩科生物在VLP包裝中的優(yōu)勢
A.多樣化:不同細(xì)胞平臺(tái),不同包裝平臺(tái),客戶量身定制;
B.周期短,最快3-4周,確保順利交付;
C.膜蛋白、細(xì)胞質(zhì)蛋白、核定位蛋白均能保證活性;
D.靶抗原豐度高于穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系豐度。
四、現(xiàn)貨產(chǎn)品
基于VLP技術(shù)平臺(tái),基恩科生物已開發(fā)出部分成熟的VLP現(xiàn)貨產(chǎn)品,均經(jīng)過細(xì)胞水平驗(yàn)證。保證膜蛋白和因子活性水平。
貨號(hào) | 靶點(diǎn) | 全稱 |
GC160400131 | VLP-ZSgreeen | VLP-GFP((熒光陰性對(duì)照) |
GC160400132 | VLP- CLDN6-6 | 人 CLDN6 蛋白病毒樣顆粒 |
GC160400133 | VLP-Claudin-6-GFP | 人VLP-Claudin-6-GFP 蛋白病毒樣顆粒 |
GC160400134 | VLP-Spondin1 | 人Spondin1因子蛋白病毒樣顆粒 |
GC160400135 | VLP-Spondin1-GFP | 人Spondin1-GFP因子蛋白病毒樣顆粒 |
GC160400136 | VLP-mGRM7 | 小鼠 GRM7/GluR7蛋白病毒樣顆粒 |
GC160400137 | VLP-mGRM7-GFP | 小鼠 GRM7/GluR7-GFP蛋白病毒樣顆粒 |
GC160400138 | VLP-mCCR9 | 小鼠 CCR9蛋白病毒樣顆粒 |
GC160400139 | VLP-mCCR9-GFP | 小鼠 CCR9-GFP蛋白病毒樣顆粒 |