腺相關(guān)病毒(Adreno-Associated Virus, AAV)屬于微小病毒科(Parvoviridae),是一類微小的、無被膜及具有二十面體結(jié)構(gòu)的單鏈DNA病毒,基因組大小約4.7-6kb,病毒顆粒的直徑在20~26nm之間,最早是1965年在實驗室研究腺病毒時被發(fā)現(xiàn),故稱為腺相關(guān)病毒,之后在人體中發(fā)現(xiàn),但并不對人致病,后不斷的基因工程化,用于載體傳遞和基因治療,它的復(fù)制和增殖依賴于輔助病毒(腺病毒、皰疹病毒等)的存在。野生型AAV病毒由直徑約20-26nm,二十面體的蛋白衣殼和約4.7-6kb的基因組組成,衣殼包含3種類型的亞基,VP1,VP2,VP3,總共60個拷貝,三種亞基比例為1:1:10(VP1:VP2:VP3)。基因組的兩端是兩個末端反向重復(fù)序列(Inverted Terminal Repeat,ITR),145個堿基形成T型發(fā)夾結(jié)構(gòu),主要用作病毒復(fù)制起點和提供包裝信號。Rep(Replication)基因編碼病毒復(fù)制所需要的四種蛋白,以分子量命名:Rep78,Rep68,Rep 52和Rep40;Cap(Capsid)基因通過不同起始密碼子的可變剪切和翻譯編碼3個衣殼亞蛋白,VP1,VP2,VP3(1:1:8/10),它們在 AAV病毒整合、復(fù)制和裝配中其重要作用。圖1 腺相關(guān)病毒基因結(jié)構(gòu)圖
重組腺相關(guān)病毒是將rep和cap基因用目的基因代替,rep和cap基因用輔助載體(GC AAV helper 1.0),同時腺相關(guān)病毒復(fù)制所需要的的腺病毒作用原件用輔助載體(AAV Ad helper)表達。
注意:攜帶目的基因的轉(zhuǎn)移質(zhì)粒上的ITR序列來自于AAV2。一般來說,包裝不同血清型的AAV,指的是使用不同血清型的衣殼蛋白表達質(zhì)粒,與攜帶AAV2 ITR的轉(zhuǎn)移質(zhì)粒進行包裝。
腺相關(guān)病毒包裝服務(wù):
基恩科生物(GeneCarer)提供ssAAV(single-stranded AAV)和scAAV(self-complementary AAV)的包裝服務(wù),涵蓋的血清型包括:AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAV9、AAVrh10、AAV-DJAAV2-retro等不同血清型病毒包裝服務(wù)。腺相關(guān)病毒GC helper 1.0質(zhì)粒和GC helpher 2.0質(zhì)粒,3質(zhì)粒用磷酸鈣法共轉(zhuǎn)染293T細胞,48h,96h各收集一次上清,進行過濾、離心、濃縮、純化,分裝后進行病毒滴度測定和質(zhì)量檢測。
血清型 | 組織親和性 |
AAV1 | 肌肉,心臟,骨骼?。òㄐ募。?,神經(jīng)組織,平滑肌,血管內(nèi)皮細胞(心臟,肝臟,腦,肺) |
AAV2 | 中樞神經(jīng),肌肉,肝臟,腦組織,眼 |
AAV3 | 肌肉,肝臟,肺,眼 |
AAV5 | 肺,眼,中樞神經(jīng),關(guān)節(jié)滑膜,胰腺 |
AAV6 | 肺,心臟,平滑肌,胰腺 |
AAV6.2 | 肺,肝臟,內(nèi)爾組織 |
AAV7 | 中樞神經(jīng)系統(tǒng),腦,視網(wǎng)膜,肝臟 |
AAV7m8 | 視網(wǎng)膜,內(nèi)耳組織 |
AAV8 | 肝臟,眼,中樞神經(jīng),肌肉,脂肪組織 |
AAV9 | 心臟,肌肉,肺(肺泡),肝臟,中樞神經(jīng),骨細胞 |
AAVrh.10 | 中樞神經(jīng)系統(tǒng),心臟,肝臟,肺,血液系統(tǒng) |
AAV-DJ | 肝臟,視網(wǎng)膜,肺,腎臟,細胞(in vitro) |
AAVDJ/8 | 肝臟,眼,中樞神經(jīng),肌肉 |
AAV Rh10 | 肺, 心臟,肌肉,中樞神經(jīng),肝臟,細胞(in vitro) |
AAV-PHP.eB | 中樞神經(jīng)系統(tǒng) |
AAV-PHP.S | 外周神經(jīng)系統(tǒng) |
AAV-ark313 | 小鼠T細胞 |
AAV9-DSS | 骨 |
AAV-retro | 神經(jīng)系統(tǒng)(逆向) |
AAV2-EC71 | 小鼠血管內(nèi)皮細胞 |
AAV-BR1 | 腦血管內(nèi)皮細胞 |
AAV-shh10 | 視網(wǎng)膜Muller膠質(zhì)細胞 |
AAV-rh74 | 肌肉(血管系統(tǒng)進入) |
AAV2-sig | 內(nèi)皮細胞特異性血清型 |
AAV9-ENT | 內(nèi)皮細胞高轉(zhuǎn)導(dǎo)血清型 |
rAAV2/cMG | 小膠質(zhì)細胞特異性血清型 |
AAV r3.45 | 大小鼠神經(jīng)干細胞(NSCs) |
AAV2/7M8 | 耳蝸毛細胞,支持細胞 |