【培養(yǎng)保存】
培養(yǎng)體系：DMEM+10%FBS+1%PS
培養(yǎng)條件：氣相:空氣,95%;CO2,5%;溫度:37℃
凍存條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS，液氮保存
【傳代步驟】
當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
(1).棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次；
(2).加1ml消化液于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-4分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加胰酶3倍體積的培養(yǎng)基終止消化；
(3).用巴氏管輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加入培養(yǎng)液后吹勻；
(4).收到細(xì)胞后首次傳代推薦將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:4的比例進(jìn)行。
【凍存步驟】
（1）.細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)；
（2）.5min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x10(6)/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)；
（3）.將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
