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DH5α感受態(tài)細(xì)胞

貨號：GC080100574

規(guī)格：10×100μL

價格：￥260.00

產(chǎn)品用途：質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、重組

產(chǎn)品描述

DH5α-菌株缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段同源重組概率，保證了插入 DNA 的穩(wěn)定性； lacZΔM15存在和 lac lq基因的缺失，不需要加 IPTG就可進(jìn)行基于α互補原理上的藍(lán)白斑篩選實驗。感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)本公司特有工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率大于 10⁸cfu/μg。
【基因型】
F -φ80dlacZ ΔM15,Δ(lacZYA -argF )U169 deoR, recA1endA1hsdR17 (rK -, mK + ) phoAsupE44 λ -thi -1gyrA96 rel
【質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟】
1.將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上解凍，待細(xì)胞解凍后，加入目的質(zhì)粒（含有線性化目的基因）到細(xì)胞中，槍頭輕輕混勻2次；
2.冰上靜置 30 分鐘；
3.42℃熱擊 90 秒鐘；
4.冰上放置 3 分鐘；
5.加入 500μl 無菌的 LB 培養(yǎng)基；
6.置于 37℃搖床中，100rpm 震蕩復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘；
7.復(fù)蘇后5000rpm離心3分鐘，棄掉多余液體留 50-100μl 混勻后涂布在含有卡那霉素抗性的 LB 平板上。待液體涂干后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時。
【注意事項】
1.感受態(tài)細(xì)胞冰上融化；
2.實驗過程中輕柔操作；
3.請勿反復(fù)凍融。

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