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BJ5183感受態(tài)細胞

貨號：GC080100573

規(guī)格：10×100μL

價格：￥280.00

產(chǎn)品用途：質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、重組

產(chǎn)品描述

BJ5183感受態(tài)是一種專用于制備重組腺病毒質(zhì)粒的E. coli BJ5183菌株。使用pUC19質(zhì)粒進行熱激活轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化效率可以高達5×10⁸cfu/μg DNA以上。BJ5183菌株提供了兩個載體同源重組的必需元件，可高效制備并擴增超螺旋狀的重組腺病毒質(zhì)粒。BJ5183細胞通常與轉(zhuǎn)移載體（一般是含有目標基因的線性載體）和代表了腺病毒基因組的超螺旋載體進行共轉(zhuǎn)化?？捎糜谥苽浜琾AdEasy-1 質(zhì)粒的BJ5183-AD-1感受態(tài)細胞，大大提高了重組效率，同時降低了由非重組穿梭質(zhì)粒引起的背景。
【基因型】
endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR)
【菌株抗性】
對卡那霉素敏感，有鏈霉素和氨芐青霉素抗性。
【質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟】

1.將感受態(tài)細胞置于冰上解凍，待細胞解凍后，加入目的質(zhì)粒（含有線性化目的基因）到細胞中，槍頭輕輕混勻2次；

2.冰上靜置 30 分鐘；

3.42℃熱擊 90 秒鐘；

4.冰上放置 3 分鐘；

5.加入 500μl 無菌的 LB 培養(yǎng)基；

6.置于 37℃搖床中，100rpm 震蕩復蘇培養(yǎng) 60 分鐘；

7.復蘇后5000rpm離心3分鐘，棄掉多余液體留 50-100μl 混勻后涂布在含有卡那霉素抗性的 LB 平板上。待液體涂干后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時。

【注意事項】

1.感受態(tài)細胞冰上融化；

2.實驗過程中輕柔操作；

3.請勿反復凍融。

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