1.  探針板水化時(shí)間？

      探針板放入37℃無CO2培養(yǎng)箱中水化過夜以得到最優(yōu)結(jié)果。探針板最長水化時(shí)間是37℃水化72小時(shí)，但需要對(duì)水化板moat補(bǔ)水或放置濕盤。

2. 實(shí)驗(yàn)中為何必須設(shè)置背景校正孔？

      背景校正孔被用來過濾掉實(shí)驗(yàn)的干擾因素，比如溫度和bufferingcapacity，這些干擾因素會(huì)影響氧含量和pH變化（非來源于代謝變化的影響）。背景校正孔還能被用來修正整板間溫度波動(dòng)，來診斷潛在溫度問題和判斷實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的數(shù)據(jù)異常情況，背景校正孔嚴(yán)禁有細(xì)胞加入。

3. 為何細(xì)胞培養(yǎng)板需要在37℃無CO2培養(yǎng)箱中放置45-60min？

       細(xì)胞培養(yǎng)板在37℃無CO2培養(yǎng)箱中孵育45-60min的目的是為了脫氣，釋放CO2，脫氣時(shí)間不能超過60min。

4. 懸浮細(xì)胞如何進(jìn)行Seahorse檢測(cè) ？

      懸浮細(xì)胞需要使用Cell Tak， poly-L-Lysine, fibronectin,Gelatin, poly-D-lysine等組織黏附劑處理細(xì)胞培養(yǎng)板，細(xì)胞培養(yǎng)板離心使細(xì)胞粘附，且不會(huì)影響測(cè)量結(jié)果。

5 .SeahorseXF檢測(cè)液中需要加入抗生素嗎？

       一般無需加入抗生素，因?yàn)榇蟛糠諷eahorse實(shí)驗(yàn)在幾小時(shí)內(nèi)就結(jié)束了。

6. 可以在seahorse檢測(cè)液中加入血清嗎？

      不建議加入血清（胎牛血清或小牛血清），因?yàn)槠鋾?huì)影響檢測(cè)液的緩沖能力，血清成分可能與進(jìn)行檢測(cè)的藥物/化合物發(fā)生非特異性結(jié)合而影響檢測(cè)效果。另外，使用加入血清的檢測(cè)液溶解藥物加載至探針板加藥孔中進(jìn)行注射時(shí)，會(huì)出現(xiàn)注射失敗的情況。

7. 為何不能使用basemedium配制的檢測(cè)液進(jìn)行Glycolyticrate與real-timeATP rate兩個(gè)實(shí)驗(yàn)？

      Base medium中含有酚紅，該物質(zhì)會(huì)影響這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的測(cè)量。

8. ph對(duì)seahorse實(shí)驗(yàn)的影響大嗎？

       Seahorse 實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定細(xì)胞代謝物（如：氧和質(zhì)子）的變化來確定OCR和ECAR，而檢測(cè)液pH會(huì)影響這些代謝的產(chǎn)生或消耗，因此保持檢測(cè)液一致的pH（37℃，pH=7.4±0.5）非常重要。

9. 同一個(gè)樣品重復(fù)差什么原因？

      重復(fù)性比較差，一般情況是細(xì)胞接種不均勻引起的，建議45度斜角沿孔壁45°C孔壁緩慢加入細(xì)胞。

10. Seahorse實(shí)驗(yàn)結(jié)束后細(xì)胞還能繼續(xù)使用嗎？

       可以用胰酶將細(xì)胞消化后繼續(xù)使用，懸浮細(xì)胞因?yàn)橛姓掣絼┮让赶瘯r(shí)間可適當(dāng)延長或過夜消化（如果需要繼續(xù)使用細(xì)胞，可以在Seahorse檢測(cè)液中加入抗生素）。