WWW.3VVVVV,COM,WWW38VECOM,WWWYOUJJZZCCOM

產(chǎn)品描述

本產(chǎn)品包括通過基因改造技術(shù)實(shí)現(xiàn)快速擴(kuò)增和超高保真的DNA聚合酶，延伸速度可達(dá)4 kb/min。同時(shí)含有dNTPs、Mg2 +、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)的穩(wěn)定劑等，濃度為2×。由于使用的超高保真 DNA聚合酶具有極強(qiáng)的3’ →5’外切酶活性，與普通高保真酶相比，保真性更高，是普通Taq DNA Polymerase的100倍以上。DNA擴(kuò)增時(shí)，只需加入模板、引物和水，使SuperMix溶液的濃度為1×即可進(jìn)行反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物為平端，可直接用于無縫克隆實(shí)驗(yàn)。

【產(chǎn)品特點(diǎn)】
減少PCR操作時(shí)間
避免因多步操作帶來的污染
優(yōu)化的緩沖液，可用于低豐度模板、復(fù)雜模板或富含GC/AT模板的擴(kuò)增基因組DNA片段的擴(kuò)增（≤ 15 kb）
Plasmid DNA片段的擴(kuò)增（≤ 15 kb）熱啟動(dòng)，高特異性
【適用范圍】
超高保真PCR快速擴(kuò)增，平端克隆，無縫克隆實(shí)驗(yàn)，基因定點(diǎn)突變

低豐度模板、復(fù)雜模板或富含GC/AT模板的擴(kuò)增長(zhǎng)片段擴(kuò)增
【產(chǎn)品組成】

Component	GC231000559-1	GC231000559-2
2×AccuProof HiFi HotStart SuperMix (-dye)	1 mL	5×1 mL
6× DNA Loading Bu?er	1 mL	2×1.5 mL

【推薦常規(guī)PCR體系（以50 μl反應(yīng)體系為例）】

Component	Volume	Final Concentration
2×AccuProof HiFi HotStart SuperMixa	25 μL	1×
10 μM Forward Primer	2.5μL	0.5 μM
10 μM Reverse Primer	2.5 μL	0.5 μM
PCR-grade Water	As Required	-
Templateb	As Required	As Required
Total Volume	50 μL	-

使用時(shí)徹底融化、混勻。
不同模板最佳反應(yīng)濃度有所不同，下表為50 μl體系推薦的模板用量：

模板種類	模板起始量
基因組 DNA	10 - 400 ng
質(zhì)粒 DNA	10 pg - 5 ng
病毒 DNA	10 pg - 10 ng
cDNA	1 - 5 μL

【PCR條件】

Step	Temperature	Duration	Cycles
Initial Denaturation	98℃	30 sec	1
Denaturation	98℃	10 sec	25-35
Annealing	55-65℃	30 sec
Extension	72℃	15-30 sec/kb
Final Extension	72℃	5 min	1

【常見問題與解決方案】
1.無產(chǎn)物或產(chǎn)物量少

重復(fù)實(shí)驗(yàn)避免加樣錯(cuò)誤優(yōu)化引物設(shè)計(jì)；
設(shè)置退火溫度梯度，優(yōu)化合適的退火溫度使用高純度模板并適當(dāng)增加模板用量；
適當(dāng)增加延伸時(shí)間；
增加循環(huán)數(shù)至35 - 40個(gè)循環(huán)增加Mg2+ 濃度至3 - 4 mM。

2.有非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物或彌散條帶

設(shè)置退火溫度梯度，優(yōu)化合適的退火溫度降低引物濃度至終濃度為0.2 μM；
優(yōu)化引物設(shè)計(jì)；
適當(dāng)減少延伸時(shí)間；
減少擴(kuò)增循環(huán)數(shù)至25 - 30個(gè)循環(huán)；
使用高純度模板并適當(dāng)減少模板用量。

相關(guān)產(chǎn)品

亚洲欧美不卡高清在线-日韩无码精品视频夜夜操-国产成人精品亚洲男人的天堂-欧洲av色爱无码综合网-理论片第一页一区二区

GeneCarer 2×HiFi HotStart SuperMix