Genecarer RT SuperMix with dsDNase是將RNA逆轉(zhuǎn)錄成為cDNA更為簡便的操作系統(tǒng)，含有第一鏈cDNA合成所需的所有試劑，只需加入RNA模板和水即可進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。合成的第一鏈cDNA可廣泛用于文庫構(gòu)建、第二鏈合成、雜交、PCR擴(kuò)增、RT-qPCR檢測等。試劑盒中包含新一代的逆轉(zhuǎn)錄酶和優(yōu)化的緩沖液,與普通逆轉(zhuǎn)錄酶系統(tǒng)相比，具有逆轉(zhuǎn)錄能力強(qiáng)（合成較多全長cDNA）、無RNase H活性、熱穩(wěn)定性高和半衰期長等優(yōu)點(diǎn)。該逆轉(zhuǎn)錄酶產(chǎn)物得率更高，獲得的cDNA片段更長，模板使用范圍更廣等特點(diǎn)。5×Reaction Mix包含逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的緩沖液，dNTPs及優(yōu)化的逆轉(zhuǎn)錄引物，Supreme Enzyme Mix包含ExonScript Reverse Transcriptase，Ribonuclease Inhibitor和dsDNase，以簡化加樣步驟。試劑盒中含有的新型dsDNase，能夠特異性去除雙鏈DNA，而不消化RNA樣品、逆轉(zhuǎn)錄引物及合成的cDNA，并且具 有熱敏感性，可在55℃快速不可逆失活，實現(xiàn)去除基因組污染與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的同步進(jìn)行。
【產(chǎn)品特點(diǎn)】
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1.高熱穩(wěn)定性，反應(yīng)溫度42-55℃，有助于RNA二級結(jié)構(gòu)打開；
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2.逆轉(zhuǎn)錄能力強(qiáng)、cDNA合成得率高，片段更長；
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3.無RNase H活性，避免第一鏈cDNA合成過程中DNA/RNA雜交體中模板RNA被降解，從而保證第一鏈cDNA合成量和長度；
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4.去除基因組DNA，保證定量結(jié)果更加準(zhǔn)確；
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5.操作簡便，僅需加入RNA模板和水即可進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成片段≤15 kb。
【適用范圍】
cDNA合成及文庫構(gòu)建、PCR擴(kuò)增
、RT-qPCR檢測
【產(chǎn)品組成】
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Component
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GC231000554-1
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GC231000554-2
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5×Reaction Mix*1
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200 μl
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400 μl
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Supreme Enzyme Mix*2
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150 μl
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300 μl
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DEPC-treated Water
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1 ml
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2×1 ml
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*1: 包含Bu?er、dNTPs、Random Hexamer Primer/Oligo (dT)20 Primer Mix。
*2: 包含ExonScript Reverse Transcriptase、Ribonuclease Inhibitor和dsDNase。
【第一鏈cDNA合成】
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在RNase-free離心管中配制如下混合液，輕輕混勻并瞬離以下成分：
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Component
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Volume
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10 pg-5 μg Total RNA or 10 pg-500 ng mRNA*3
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As Required
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DEPC-treated Water
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up to 13 μl
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5×Reaction Mix*4
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4 μl
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Supreme Enzyme Mix
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3 μl
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*1: 為保證逆轉(zhuǎn)錄成功，請使用高質(zhì)量RNA模板。
*2: 5×Reaction Mix在使用前需充分混勻。
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按照下表所示進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：
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Temperature
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Time
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Note
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25℃
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10 min
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隨機(jī)引物與RNA模板配對及去除基因組DNA
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55℃
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15 min
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逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及dsDNase快速滅活
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85℃
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5 min
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逆轉(zhuǎn)錄酶滅活
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產(chǎn)物可立即用于PCR或qPCR反應(yīng)，或在-20℃保存，并在半年內(nèi)使用；長期存放建議分裝后在-70℃保存。cDNA應(yīng)避免反復(fù)凍融。
【注意事項】
防止RNase污染請保持實驗區(qū)域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實驗所用的離心管、槍頭等耗材均需 保證RNase-free。
